Urbana-Şampandakı İllinoys Universitetinin tədqiqatçıları nuklein turşusunun gücləndirilməsinə ehtiyac olmadan bir neçə dəqiqə ərzində qan dövranı infeksiyalarını aşkar etməyə qadir olan CRISPR əsaslı diaqnostik alət hazırlayıblar. CRISPR-Cascade analizi attomolyar həssaslığa nail olur və qan axını infeksiyaları ilə əlaqəli patogenlərdən DNT vasitəsilə eyni vaxtda çoxlu patogenləri müəyyən etmək üçün OR-qapılı məntiq funksiyasını özündə birləşdirir.

Qan axını infeksiyaları fəsadların qarşısını almaq üçün sürətli identifikasiya tələb edir, lakin standart diaqnostik üsullar polimeraza zəncirvari reaksiyaya (PZR) və daxili emal vaxtlarına malik izotermik gücləndirmə üsullarına əsaslanır . SHERLOCK və DETECTR kimi CRISPR əsaslı aşkarlama alətləri spesifikliyi təkmilləşdirib, lakin gücləndirmədən asılı olmağa davam edərək, onların dönüş vaxtını və klinik şəraitdə praktikliyini məhdudlaşdırır.

Proceedings of the National Academy of Sciences jurnalında dərc olunan “Qan nümunələrində patogen aşkarlanması üçün gücləndirilməsiz, OR-qapılı CRISPR-Şəlalə reaksiyası” adlı araşdırmada tədqiqatçılar CRISPR ilə idarə olunan əks əlaqə dövrəsinin gücləndirilmədən ultra aşağı konsentrasiyalarda patogen DNT-ni aşkar edə bilib-bilmədiyini müəyyən etmək üçün laboratoriya əsaslı araşdırma apardılar.

Onların CRISPR-Cascade reaksiyası patogen DNT-nin gücləndirilmədən aşkarlanmasına nail olmaq üçün iki ribonukleoprotein kompleksindən, T1 və T2-dən istifadə edir. Hədəfin tanınmasından sonra, T1 kompleksindəki Cas12a bloklanmış nuklein turşularını parçalayır, T2 kompleksində daha çox Cas12a fermentini aktivləşdirən dəyişdirilə bilən qəfəsli RNT-nin buraxılmasına səbəb olur. Bu öz-özünə davam edən əks əlaqə halqası 10 dəqiqə ərzində attomolar həssaslıqda flüoresan əsaslı sürətli aşkarlamağa imkan verir.

Reaksiya temperaturu (33°C), sterik maneə strategiyaları və ferment kinetikasındakı optimallaşdırmalar spesifikliyi yaxşılaşdırdı və qeyri-spesifik siqnal müdaxiləsini azaldıb.

https://googleads.g.doubleclick.net/pagead/ads?client=ca-pub-0536483524803400&output=html&h=188&slotname=8188791252&adk=1687169288&adf=4054963813&pi=t.ma~as.8188791252&w=750&abgtt=6&fwrn=4&lmt=1741937467&rafmt=11&format=750×188&url=https%3A%2F%2Fphys.org%2Fnews%2F2025-03-crispr-cascade-bloodstream-infections-minutes.html&wgl=1&uach=WyJXaW5kb3dzIiwiMTkuMC4wIiwieDg2IiwiIiwiMTM0LjAuNjk5OC44OSIsbnVsbCwwLG51bGwsIjY0IixbWyJDaHJvbWl1bSIsIjEzNC4wLjY5OTguODkiXSxbIk5vdDpBLUJyYW5kIiwiMjQuMC4wLjAiXSxbIkdvb2dsZSBDaHJvbWUiLCIxMzQuMC42OTk4Ljg5Il1dLDBd&dt=1741937467342&bpp=1&bdt=90&idt=151&shv=r20250305&mjsv=m202503120101&ptt=9&saldr=aa&abxe=1&cookie=ID%3Df22668bce9793ae4%3AT%3D1735196613%3ART%3D1741937446%3AS%3DALNI_Mb4Xpwl1SO1AcvqroR6xccDm_sheQ&gpic=UID%3D00000f7c5320f40b%3AT%3D1735196613%3ART%3D1741937446%3AS%3DALNI_Mb1dz_DHiT2yDzXLMaB9CDkQl4XGg&eo_id_str=ID%3Dcdf7f2f01784f52d%3AT%3D1735196613%3ART%3D1741937446%3AS%3DAA-Afjb8kbeupLLyQ0QHQmZxpM4v&prev_fmts=0x0&nras=1&correlator=3368591096616&frm=20&pv=1&rplot=4&u_tz=240&u_his=3&u_h=1080&u_w=1920&u_ah=1032&u_aw=1920&u_cd=24&u_sd=1&dmc=8&adx=448&ady=1858&biw=1905&bih=945&scr_x=0&scr_y=0&eid=95354313%2C95354336%2C95354598%2C31090986%2C31090357&oid=2&pvsid=428597984740918&tmod=1151282108&uas=0&nvt=1&ref=https%3A%2F%2Fphys.org%2F&fc=1920&brdim=0%2C0%2C0%2C0%2C1920%2C0%2C1920%2C1032%2C1920%2C945&vis=1&rsz=%7C%7CpeEbr%7C&abl=CS&pfx=0&fu=128&bc=31&bz=1&td=1&tdf=2&psd=W251bGwsbnVsbCxudWxsLDNd&nt=1&ifi=2&uci=a!2&btvi=1&fsb=1&dtd=156

Sınaq zamanı analiz on dəqiqə ərzində patogen DNT-li qan nümunələrində Metisillinə Həssas Staphylococcus aureus (MSSA), Metisillinə Davamlı Staphylococcus aureus (MRSA), Escherichia coli (E. coli) və Hepatit B Virusunu uğurla müəyyən etdi . OR-qapılı məntiq funksiyası klinik tətbiqlər üçün sürətli və genişlənə bilən bir yanaşma təmin edərək, bir reaksiyada birdən çox patogenin eyni vaxtda aşkarlanmasını təmin etdi.

Mövcud metodlarla müqayisələr sürətləndirilmiş qrafiki vurğulayır. PCR ilə ənənəvi kultivasiya 24-72 saat çəkə bilər. Kultivasiya olmadan PCR üsulları 3-6 saat davam edir. Təxminən 1 saat çəkən sürətli PCR əsaslı üsullar mövcuddur.

Nümunə hazırlamaq da daxil olmaqla CRISPR-Cascade təxminən yarım saat tələb edir ki, bu da onu qan dövranı infeksiyasının ən sürətli diaqnostikası edir. Nümunə hazırlığını daha da yaxşılaşdırmaq və 15 dəqiqədən az bir işarəyə yaxınlaşmaq potensialı da var. Potensial tətbiqlərə yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikası, müayinə nöqtəsi və fərdiləşdirilmiş tibb daxildir.

Ətraflı məlumat: Jongwon Lim və digərləri, Qan nümunələrində patogen aşkarlanması üçün gücləndiricisiz, OR-qapılı CRISPR-Cascade reaksiyası, Milli Elmlər Akademiyasının Materialları (2025). DOI: 10.1073/pnas.2420166122

Jurnal məlumatı: Milli Elmlər Akademiyasının Materialları 

© 2025 Science X Network